「12000 rpm 离心 10 分钟」这种写法其实是不严谨的——同样的转速,在不同离心机上产生的离心力可能差一倍。真正需要统一的是 g(相对离心力 RCF),而不是转速。
| 应用场景 | 常用离心力 | 时间 | 温度 |
|---|---|---|---|
| 细胞收集(悬浮细胞) | 300–500 × g | 5 min | 室温或 4℃ |
| 细菌菌体收集 | 5000–8000 × g | 5–10 min | 4℃ |
| 血清 / 血浆分离 | 1500–2000 × g | 10 min | 4℃ |
| 细胞裂解液澄清 | 12000–16000 × g | 10–15 min | 4℃ |
| 质粒小提(柱式) | 12000–13000 × g | 1 min | 室温 |
| RNA 沉淀(异丙醇) | 12000 × g | 10 min | 4℃ |
| 线粒体粗提 | 10000–12000 × g | 15 min | 4℃ |
| 外泌体(超速) | 100000–120000 × g | 70–90 min | 4℃ |
是的。RCF 是 Relative Centrifugal Force(相对离心力)的缩写,单位用重力加速度的倍数表示,写作「× g」。所以「10000 × g」和「RCF = 10000」说的是同一件事。注意这个 g 是斜体小写,不是质量单位克。
固定角转子(管子固定倾斜)适合沉淀致密颗粒,如细菌、细胞碎片,离心时间短、沉淀紧实,是常规微量离心机的默认配置;水平转子(离心时管子甩成水平)沉淀面在管底、界面平整,适合分层实验,如密度梯度离心、血液分层、细胞爬片。两者有效半径不同,切换时必须重新换算 g 值。
严格来说沉降效果由 g × 时间共同决定,但两者并非简单成反比,还受颗粒大小、密度和介质黏度影响。实践中的建议是:优先保持 g 值与 protocol 一致,时间按原方案执行;如果设备最大转速达不到要求的 g,可适当延长时间,但需在预实验中验证沉淀是否完全(看上清中是否还有目标物)。
常见原因有四:①实际 g 值低于 protocol(rpm 没换算);②温度偏差,冷冻状态下某些沉淀更松;③缓冲液成分差异,盐浓度和 pH 影响颗粒聚集;④减速设置,很多离心机可调减速档位,急刹车会把已沉好的沉淀冲散,做梯度或松散沉淀时应把减速档调到最低(soft/brake off)。